प्रोटीन अभिव्यक्ति का अवलोकन

ProteInexpression एक कृत्रिम वेक्टर में लक्ष्य जीन को पुन: पेश करने की तकनीक को संदर्भित करता है और फिर इसे प्राप्तकर्ता सेल या सेल-फ्री सिस्टम में हेटेरोलोगस सिस्टम में प्रोटीन व्यक्त करने के लिए पेश करता है।

प्रोटीन अभिव्यक्ति उस समस्या को हल कर सकती है जो देशी प्रोटीन को प्राप्त करना मुश्किल है। 1970 के दशक में विषम प्रोटीन अभिव्यक्ति की पहली स्थापना के बाद से, हजारों पुनः संयोजक प्रोटीन को सफलतापूर्वक व्यक्त किया गया है, जो जैव प्रौद्योगिकी और बायोमेडिकल अनुसंधान और उद्योग के निरंतर विकास को प्रभावी ढंग से बढ़ावा देता है।

उद्देश्य:

प्रोटीन अभिव्यक्ति के माध्यम से, पहले प्रोटीन प्राप्त करना संभव है जो प्राकृतिक स्रोतों से प्राप्त करना मुश्किल है।

दूसरे, बड़े बैच और प्रोटीन अभिव्यक्ति उत्पादों की उच्च शुद्धता न केवल लक्ष्य प्रोटीन के विश्लेषण की सुविधा प्रदान करती है, बल्कि लागत को बहुत कम करती है।

इससे भी महत्वपूर्ण बात, पुनः संयोजक प्रोटीन को आमतौर पर मेजबान सेल के उच्च बायोसेफ्टी को इंगित करने के लिए चुना जाता है, इस प्रकार रोगजनक मेजबान के कुछ संभावित जैव सुरक्षा जोखिमों से बचते हैं।

तरीका:

इसमें मुख्य रूप से जीन टुकड़ा प्रतिकृति की प्रक्रियाएं, अभिव्यक्ति प्रणाली में परिचय, प्रेरित अभिव्यक्ति, उत्पाद शोधन और विश्लेषण शामिल हैं।

प्रोटीन अभिव्यक्ति का अवलोकन

वर्गीकरण:

प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणालियों को आम तौर पर विभाजित किया जा सकता है:

1। परमाणु अभिव्यक्ति प्रणाली: एस्चेरिचिया कोलाई सबसे आम प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणाली है, जिसमें स्पष्ट आनुवंशिक पृष्ठभूमि, सुविधाजनक प्रजनन, कम लागत और उच्च अभिव्यक्ति के फायदे हैं। हालांकि, इसमें अनुवाद संशोधन तंत्र का अभाव है और प्रोटीन अभिव्यक्ति को संशोधित करने के लिए ग्लाइकोसिलेशन या विशेष चयन बिंदु दरार के लिए उपयुक्त नहीं है। बेसिलस सबटिलिस का उपयोग प्रोटीन अभिव्यक्ति के लिए भी किया जा सकता है, और इसके फायदे मजबूत चयापचय अभिव्यक्ति क्षमता और कम प्रोटीज गतिविधि हैं, जिसने धीरे -धीरे ध्यान आकर्षित किया है।

2। यूकेरियोटिक एक्सप्रेशन सिस्टम: अनुवाद के बाद ग्लाइकोसिलेशन की एक निश्चित डिग्री प्राप्त की जा सकती है, जो यूकेरियोटिक प्रोटीन की प्राकृतिक गतिविधि के करीब है। यह मुख्य रूप से शामिल है। ① खमीर अभिव्यक्ति प्रणाली (सामान्य लाल खमीर, शराब बनाने वाला खमीर, आदि), खमीर उच्च घनत्व मधुर हो सकता है, अनुवाद के बाद संशोधित किया जा सकता है, इसमें प्रोकैरियोटिक और यूकेरियोटिक मेजबान कोशिकाओं के फायदे हैं, और यह एक अच्छा प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणाली भी है। ② कीट सेल अभिव्यक्ति प्रणाली: एक्सोजेनस जीन को अभिव्यक्ति के लिए बैकुलोवायरस वेक्टर द्वारा कीट कोशिकाओं में ट्रांसफ़ेक्ट किया जाता है। यह यूकेरियोटिक प्रोटीन के लिए एक उच्च अभिव्यक्ति प्रणाली है, जो झिल्ली प्रोटीन, मैक्रोमोलेक्युलर प्रोटीन, प्रोटीन किनेसेस और अन्य प्रोटीन के लिए उपयुक्त है जो प्रोकैरियोटिक सिस्टम में व्यक्त करना मुश्किल है। ③ स्तनधारी सेल अभिव्यक्ति प्रणाली: स्तनधारी कोशिकाओं का अनुवाद और सजावट दक्षता खमीर और कीट कोशिका प्रणालियों की तुलना में बहुत अधिक है। स्तनधारी कोशिकाओं की संरचना और कार्य देशी यूकेरियोटिक प्रोटीन के करीब हैं, लेकिन अभिव्यक्ति का स्तर कम है और लागत अधिक है।

3। सेल-फ्री एक्सप्रेशन सिस्टम: टारगेट प्रोटीन को कणों और पीसीआर उत्पादों से सीधे व्यक्त किया जा सकता है, और अभिव्यक्ति प्रणाली एस्चेरिचिया कोलाई, गेहूं के भ्रूण, खरगोश रेटिकुलोसाइट्स, आदि से सेल-मुक्त अर्क है। सेल-मुक्त प्रोटीन अभिव्यक्ति के फायदे उत्पादों को व्यक्त करने की क्षमता हैं जो अन्य प्रणालियों में व्यक्त करने के लिए मुश्किल हैं, उच्च थ्रूट, और ऑटोमेशन, लेकिन ऑटोमेशन, ऑटोमेशन, लेकिन ऑटोमेशन, ऑटोमेशन, लेकिन ऑटोमेशन।