फॉस्फोराइलेशन लेबलिंग तकनीक का एक संक्षिप्त परिचय

फॉस्फोराइलेशन संशोधन कोशिकाओं के जीवन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है और कई पहलुओं को प्रभावित करता है। प्रोटीन का फॉस्फोराइलेशन विभिन्न जैविक प्रक्रियाओं से निकटता से संबंधित है, जैसे कि डीएनए क्षति की मरम्मत, ट्रांसक्रिप्शनल विनियमन, सिग्नल ट्रांसडक्शन और सेल एपोप्टोसिस के विनियमन। फॉस्फोराइलेटेड प्रोटीन और पेप्टाइड्स का अध्ययन करने से इन प्रक्रियाओं के तंत्र को प्रकट करने और जीवन गतिविधियों के सार के बारे में हमारी समझ को गहरा करने में मदद मिलती है। हांग पेप्टाइड जैव प्रौद्योगिकी के पास परिपक्व फॉस्फोराइलेशन पेप्टाइड लेबलिंग तकनीक है। अपने स्वयं के तकनीकी और कच्चे माल के लाभों का लाभ उठाते हुए, हम फॉस्फोराइलेटेड सेरीन (PSER), फॉस्फोराइलेटेड थ्रेओनीन (PTHR), और फॉस्फोराइलेटेड टाइरोसिन (PTYR) से युक्त पेप्टाइड्स को संश्लेषित कर सकते हैं, और एक से पांच फॉस्फोराइलेशन साइटों के साथ उच्च गुणवत्ता वाले पेप्टाइड्स प्रदान करते हैं। 

फॉस्फोराइलेशन मार्किंग तकनीक का अवलोकन: 

फॉस्फोराइलेटेड पेप्टाइड्स मुख्य रूप से पेप्टाइड श्रृंखला में सेरीन (सेर), टायरोसिन (टायर), और थ्रोनिन (थ्रोन) अवशेषों के साइड चेन हाइड्रॉक्सिल समूहों को अम्लीय फॉस्फेट एस्टर में संशोधित किया जा रहा है। फॉस्फोराइलेटेड पेप्टाइड्स प्रोटीन फॉस्फोराइलेशन के अध्ययन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। इसलिए, प्रोटीन और पेप्टाइड्स के फॉस्फोराइलेशन प्रतिक्रियाओं का गहराई से पता लगाना और परिपक्व और सरल सिंथेटिक विधियों को खोजने के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। 

वर्तमान में, पेप्टाइड्स के फॉस्फोराइलेशन संशोधन के तरीके मुख्य रूप से दो श्रेणियों में आते हैं: 

(1) पेप्टाइड अनुक्रम में उचित रूप से संरक्षित फॉस्फोराइलेटेड एमिनो एसिड को सीधे शामिल करें: 

सबसे पहले, अमीनो एसिड जिन्हें फॉस्फोराइलेटेड (जैसे THR, SER या TYR) की आवश्यकता होती है, उन्हें फॉस्फोराइलेशन उपचार के अधीन किया जाता है और उचित रूप से संरक्षित किया जाता है। फिर, पारंपरिक ठोस-चरण पेप्टाइड संश्लेषण (एसपीपीएस) प्रक्रिया के बाद, फॉस्फोराइलेटेड मोनोमर्स पॉलीपेप्टाइड की विशिष्ट साइटों से जुड़े होते हैं। यह विधि संचालित करने के लिए सरल है और पेप्टाइड्स के बिंदु फॉस्फोराइलेशन संशोधन के लिए मुख्य तकनीकों में से एक बन गई है। 

(२) राल पर पॉलीपेप्टाइड अनुक्रम को संश्लेषित करने के बाद, SER, Tyr या THR के साइड चेन हाइड्रॉक्सिल समूहों को फॉस्फोराइलेट किया गया है: 

फॉस्फोराइलेशन संशोधन करते समय, यदि पॉलीपेप्टाइड में फॉस्फोराइलेटेड मोनोमर्स को सीधे संघनित करने की विधि को अपनाया जाता है, तो फॉस्फोराइलेटेड एमिनो एसिड, इसकी बड़ी साइड चेन के कारण, स्टेरिक बाधा में वृद्धि का कारण बनता है, जिससे पेप्टाइड श्रृंखला के साथ संघनन मुश्किल हो जाता है। इसके अलावा, बाद के अमीनो एसिड की शुरूआत भी अपेक्षाकृत जटिल हो जाएगी, खासकर जब कई फॉस्फोराइलेशन साइटें हों। संश्लेषण प्रक्रिया बेहद मुश्किल होगी, और अंतिम उत्पाद बहुत जटिल होगा, जिससे पृथक्करण मुश्किल हो जाएगा और उपज बेहद कम होगी। इसलिए, जब पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला में फॉस्फोराइलेशन की आवश्यकता होती है, तो पहले राल पर पॉलीपेप्टाइड अनुक्रम के संश्लेषण को पूरा करने के लिए विचार किया जा सकता है, और फिर सेर, टायर या थ्र के साइड चेन हाइड्रॉक्सिल समूहों को फॉस्फोराइलेट करें। इस प्रक्रिया के दौरान, पहले चुनिंदा रूप से अमीनो एसिड के लेबल किए जाने वाले अमीनो एसिड के समूहों की रक्षा करने वाले साइड चेन को हटा दें। Tyr और Thr के लिए, उनकी साइड चेन के असुरक्षित अमीनो एसिड को सीधे प्रतिक्रिया दी जा सकती है। साइड चेन प्रोटेक्टिंग समूहों को 1% TFA/DCM की स्थिति के तहत मात्रात्मक रूप से हटाया जा सकता है। इस पद्धति में, बीआईएस-बेंजिल फॉस्फोरामिडेट और टेट्राजोल के सक्रिय मध्यवर्ती को बाद की प्रतिक्रिया से उत्पन्न किया जा सकता है, और इसे हाइड्रॉक्सिल समूह से जोड़ा जा सकता है। फिर, पेरोक्साइड एसिड की स्थिति के तहत एक ऑक्सीकरण प्रतिक्रिया फॉस्फोनील समूह को उत्पन्न करने के लिए किया जा सकता है, जो फॉस्फोराइलेशन को पूरा करता है।