फ्रेट पेप्टाइड प्रौद्योगिकी

प्रतिदीप्ति अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण

प्रतिदीप्ति अनुनाद ऊर्जा हस्तांतरण (FRET) एक गैर-विकिरणकारी ऊर्जा हस्तांतरण प्रक्रिया है जिसमें दाता उत्साहित राज्य ऊर्जा को इंटरमॉलिक्युलर इलेक्ट्रिक जोड़ों की बातचीत के माध्यम से स्वीकर्ता उत्साहित राज्य में स्थानांतरित किया जाता है। इस प्रक्रिया में फोटॉन शामिल नहीं हैं और इसलिए यह गैर-विकिरणक है। इस परख में तेज, संवेदनशील और सरल होने के फायदे हैं।

FRET परख में प्रयुक्त डाई समान हो सकती है। लेकिन अधिकांश अनुप्रयोगों में, अलग -अलग रंगों का उपयोग वास्तव में किया जाता है। संक्षेप में, चमकदार अनुनाद ऊर्जा का हस्तांतरण दाता समूह के उत्साहित होने पर दाता (डाई 1) से स्वीकर्ता (डाई 2) में द्विध्रुवीय की एक जोड़ी का हस्तांतरण है। सामान्य तौर पर, डोनर फ्लोरोफोर समूह का उत्सर्जन स्पेक्ट्रम स्वीकर्ता समूह के अवशोषण स्पेक्ट्रम के साथ ओवरलैप होता है। "जब दो फ्लोरोफोरस के बीच की दूरी उपयुक्त होती है (10 - 100 ए), तो दाता से स्वीकर्ता तक फ्लोरोफोर ऊर्जा का हस्तांतरण देखा जा सकता है।" ऊर्जा हस्तांतरण की विधि रिसेप्टर की रासायनिक संरचना पर निर्भर करती है:

1। आणविक कंपन में परिवर्तित हो जाता है, अर्थात, ऊर्जा हस्तांतरण का चमकदार प्रकाश गायब हो जाता है। (रिसेप्टर एक हल्का क्वेंचर है)

2। उत्सर्जन रिसेप्टर की तुलना में अधिक तीव्र है, जिसके परिणामस्वरूप माध्यमिक प्रतिदीप्ति स्पेक्ट्रम में एक रेडशिफ्ट होता है। ” (रिसेप्टर्स चमकदार उत्सर्जक हैं)।

दाता समूह (एडन्स) और स्वीकर्ता जीन (डबिसिल) समान रूप से एचआईवी प्रोटीज के प्राकृतिक सब्सट्रेट से जुड़े होते हैं, और जब सब्सट्रेट को डिस्कनेक्ट नहीं किया जाता है, तो डबिसिल एडन्स को क्वेन कर सकता है और फिर फ्लोरीन के लिए अवांछनीय हो जाता है। एचआईवी -1 प्रोटीज वियोग पर, एडन्स को अब डबिसिल द्वारा बुझाया नहीं जाता है, और एडन्स ल्यूसिफरेज को बाद में पता लगाया जा सकता है। प्रोटीज इनहिबिटर की उपलब्धता की निगरानी एडन्स की प्रतिदीप्ति तीव्रता में परिवर्तन से की जा सकती है।

FRET पेप्टाइड्स पेप्टिडेज़ निरर्थक का अध्ययन करने के लिए सुविधाजनक उपकरण हैं। चूंकि इसकी प्रतिक्रिया प्रक्रिया की निरंतर निगरानी की जा सकती है, इसलिए यह एंजाइम गतिविधि का पता लगाने के लिए एक सुविधाजनक विधि प्रदान करता है। दाता/स्वीकर्ता द्वारा पेप्टाइड बॉन्ड के हाइड्रोलिसिस के बाद उत्पादित शीन नैनोमोलर सांद्रता में एंजाइम गतिविधि का एक उपाय प्रदान करता है। जब FRET पेप्टाइड बरकरार होता है, तो यह आंतरिक फ्लैश के अचानक गायब होने को दर्शाता है, लेकिन जब डोनर/स्वीकर्ता के विपरीत कोई भी पेप्टाइड बॉन्ड टूट जाता है, तो यह एक फ्लैश जारी करता है, जिसे लगातार पता लगाया जा सकता है और एंजाइम गतिविधि को फिर से निर्धारित किया जा सकता है।